FuturePAGE预制胶基本参数信息
胶板尺寸:约10×8cm,厚4.5mm
凝胶尺寸:约8.5×7cm,厚1.0mm
上样孔数:10孔、 12孔、15孔
推荐上样量:
10孔胶每孔最大上样量为70μl,推荐上样量35μl以下
12孔胶每孔最大上样量为50μl,推荐上样量25μl以下
15孔胶每孔最大上样量为30μl,推荐上样量15μl以下
电泳体系:Bis-Tris 凝胶缓冲系统
电泳缓冲液:Mops Running Buffer(货号:BR0001-02,务必使用配套缓冲液)
凝胶浓度:固定浓度胶:8%、10%、12%;梯度胶:4-12%、4-20%
推荐电泳条件:电压不要超过180V,建议方案160V,45-50min
兼容主流mini电泳槽:Bio-Rad、天能、六一、WIX、君意东方等
保存条件:2-8℃保存 1年
FuturePAGE预制胶分离范围示意图
注意:
以上分离范围是MOPS的运行缓冲液的分离范围。
如果使用预制胶进行WB实验,推荐使用梯度胶:
①梯度胶转印时,大分子量蛋白停留在低浓度部分,较大程度上减少残留条带;
②梯度凝胶分离范围广,大、小分子量蛋白可以跑在同一块凝胶上;
③固定浓度胶可以对窄范围的条带做精细的分辨。
FuturePAGE预制胶使用方法说明:
使用顺序:

①使用前先撕去底部金色胶条,再拔掉梳子,顺序不能颠倒;
②如果电泳槽密封胶条顶部凸起,需要将胶条取出、翻转,将其平坦的一面朝外并重新插回内框架的凹槽中;
③请使用配套的MOPS-SDS Running Buffer电泳液。蛋白电泳实验前,需检查是否漏液:内槽电泳液加满后,观察两分钟,看是否有缓冲液流出;
④蛋白电泳时,胶板和卡板需要卡到底,避免漏液;
⑤配好的电泳液,外槽可以重复使用,使用次数建议不超过3次;内槽建议尽量使用新鲜电泳液;
⑥不同样品的蛋白上样量存在差异,纯蛋白推荐上样量0.1-2ug,总蛋白推荐上样量10-15ug;
⑦建议不同上样孔之间上样量差异不要过大。
FuturePAGE预制胶常见问题解答
1.电泳仪报错/条带跑不下来

原因及解决方案:
底部胶条没有撕下来
2.marker、样品跑没了

原因及解决方案:
电极插反
3.条带出现弧度

原因及解决方案:
安装问题致使内槽漏液,可检查密封圈是否安装正确;同时安装2块预制胶,是否出现一高一低,是否出现歪斜。
4.条带迁移异常

原因及解决方案:
使用了错误的缓冲液,建议使用配套的Mops缓冲液。
5.梳齿明显萎缩、胶体出现气泡

原因及解决方案:
胶体冻伤,请置于2-8℃保存。保证冰箱或者冷库的温度,避免放置于出风口等温度不均匀区域。
6.WB背景深

原因及解决方案:
封闭和洗膜时,膜片充分浸透液体,尽量不要多张叠加。清洗海绵之后,用纯水泡过夜,充分洗净海绵。
7.条带双耳

原因及解决方案:
样品粘稠,提取时可加入核酸酶或者低温超声处理。