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预制胶 电泳首选
  发表时间: 2018-05-21 07:05:49   浏览次数:

 WB 预制胶

WB 预制胶是一款高性能的小型聚丙烯酰胺凝胶,独特的胶板设计可以提高条带分辨率,改善样品在上样孔里的分布状态,使得条带更加均匀。预制胶不含有SDS,依赖于采用合适的电泳缓冲液和相应试剂,是SDS-PAGE和非变性凝胶电泳的理想材料


预制胶提供不同浓度的梯度胶和固定浓度胶。梯度浓度包括(4-20%, 4-12%8-16%) ,固定浓度胶包括(8%,10%12%) 点样孔数分别为10孔,12孔和15孔。

主要特点:

上样量大——最大上样量可达 80 μl, 高于同类产品

简单易用——特殊上样口设计,普通 10 μl 吸头上样

高分辨率——蛋白条带分离更为清晰和均一

保质期长——常温使用,2-8℃可保存 12 个月

兼容性好——适合大多数小型电泳槽

重复性高——不同批次预制胶的一致性好

物美价廉——节约实验成本

凝胶选择指导一览表:

 

操作使用

A、电泳缓冲液和电泳槽的准备

1、使用 WB 预制凝胶专用电泳缓冲液

2、将 WB 预制凝胶从包装袋中取出,撕掉胶板底部的胶带(如下图)

 

 

 

 

3、平稳地将梳子从胶板中推出(见下图)。 

 

4、将胶板放入凝胶电泳装置中。

请参阅电泳装置制造商的使用说明。

Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra System 电泳槽的使用注意事项: 将电泳槽内框架的绿色硅橡胶密封条取出,然后将其平坦的一面朝外并重新插回内框架的凹槽中。

 

 

 

 

5、在电泳槽的内槽中倒入足够的 1X 电泳缓冲液,使其覆盖上样孔 5-7mm,在外槽中加入相同的电泳缓冲液以确保适当的冷却。为获得最好的效果,外槽的缓冲液需要加到与内槽持平的位置或稍低,但不可漫过胶板。(注:Tri-Glycine 电泳缓冲液与 WB 预制凝胶不兼容,请不要使用。

 

6、使用注射器或其他工具吸取适量的 1X 的电泳缓冲液,将上样孔轻轻冲洗干净,去除气泡和残留的储存缓冲液。

 

B、样品的制备

1、SDS-PAGE 凝胶电泳

蛋白样品

X ul

蛋白上样缓冲液(5X)

2 ul

去离子水

加至 10ul

上样前将样品加热至10010 分钟

2、非变性 PAGE 凝胶电泳

 

WB 预制凝胶中不含有 SDS ,可用于非变性电泳。蛋白质样品需使用非还原性和非变性的样品缓冲液制备,以保持蛋白质的二级结构和原生电荷。蛋白质的迁移率取决于蛋白质的大小、空间结构以及它的净电荷。WB 预制凝胶为 pH6.4,进行非变性电泳时需注意蛋白样品的酸碱性,同时,非变性电泳时间同城比 SDS-PAGE 电泳时间长。

 

蛋白样品

X ul

蛋白上样缓冲液(5X)

2 ul

去离子水

加至 10ul

 不用加热

C、电泳过程

1蛋白质样品上样操作

让上样枪头的尖端垂直插入到上样孔中能够获得最佳的上样效果,枪头不能戳破胶体,更不能使胶板变形导致样品漏液

 

注意事项:最佳上样量必须通过实验来确定,样品过量会导致条带的拖尾和失真。加入过量的含自由状态碳水化合物的蛋白,可能会导致条带变形或者蛋白无法穿入胶中  

2.将电泳槽盖子盖好,并将电源线插头插入电泳仪电泳插孔(颜色配对),在 140V 电压下电泳 45-55 分钟直溴酚蓝条带跑到凝胶底部。

                        WB预制凝胶电泳参数

电压

开始电流

结束电流

电泳时间

140V

75-100mA

30-50mA

45-55 分钟

凝胶电泳时间,取决于环境温度,需要自行摸索。

注意事项:确保使用兼容的电泳槽,内外槽之间液体的泄露会导致低迁移率。电泳时间  可能会改变,取决于电源和凝胶浓度

3、从胶板中取出凝胶

用试剂盒自带的撬具,在下图红色箭头的三个位置上下撬动,直至胶板两侧被完全分开,小心取出凝胶进行后续实验操作

 

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