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慢病毒使用说明:
一、准备贴壁细胞第1天,在24孔培养板(以此为例)接种若干孔,每 个孔内接种3~5×10的4次方个目的细胞,以便进 行病毒感染时细胞的融合度约为70%。
第2天,观察细胞生长状态,如细胞状态较好则开 始侵染。
二、
病毒侵染取出-80℃的储存的病毒,在冰上融化后,瞬时离心。 使用含血清、不含抗生素的培养基,根据MOI 配制 慢病毒稀释液(可设置不同MOI)。根据需要添加 Polybrene, 添加时需要设置合适的浓度吸去原细 胞培养器皿中的培养基,添加配制好的慢病毒稀释 液。混匀后放于二氧化碳培养箱(37℃、5%的二氧化 碳)孵育过夜。
三、
去除病毒第3天,更换培养液。一般在24小时候内将含有慢 病毒的培养液更换成正常培养液;如果侵染对细 胞有明显毒性作用而影响细胞生长状态,可以在 8-12小时更换培养液。
四、
检测结果第4天,带荧光标签的慢病毒可通过倒置荧光显微 镜进行侵染效果评估;带萤火虫荧光素酶标签的病 毒可通过荧光素酶实验进行侵染效果评估:也可通 过qPCR 或WB 进行侵染效果评估。
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